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技術(shù)文章

細(xì)胞因子生物學(xué)活性檢測和濃度測定方法點(diǎn)擊次數(shù):1820 更新時(shí)間:2018-02-24

   一:細(xì)胞因子是由細(xì)胞分泌的具有生物活性的小分子蛋白物質(zhì)的統(tǒng)稱。在免疫應(yīng)答過程中,細(xì)胞因子在免疫調(diào)節(jié)、炎癥應(yīng)答、腫瘤轉(zhuǎn)移等生理和病理過程中起重要作用。細(xì)胞因子的檢測不僅是基礎(chǔ)免疫研究的有較手段,同時(shí)在臨床疾病診斷、病程觀察、療效判斷及細(xì)胞因子治療監(jiān)測方面具有重要價(jià)值。
  但是,由于細(xì)胞因子在體內(nèi)的含量甚微,給細(xì)胞因子的檢測帶來困維,細(xì)胞因子的檢4.細(xì)胞病變抑制法
  病毒可造成靶細(xì)胞的損傷,干擾素等則可抑制病毒所導(dǎo)致的細(xì)胞病變,因此可利用細(xì)胞病變抑制法檢測這類因子。
  二、免疫學(xué)檢測法
  細(xì)胞因子均為蛋白或多肽,具有較強(qiáng)的抗原性。隨著重組細(xì)胞因子的出現(xiàn),可較方便地獲得細(xì)胞因子的特異性抗血清或單克隆抗體,因此可利用抗原抗體特異性反應(yīng)的特性,用免疫學(xué)技術(shù)定量檢測細(xì)胞因子。盡管細(xì)胞因子種類繁多,只要獲得了針對某一因子的特異性抗體,為大規(guī)模檢測臨床病人血清中細(xì)胞因子的含量提供了方便。本法僅測定細(xì)胞因子的抗原性,與該因子活性不一定相平行,因此要了解細(xì)胞因子的生物學(xué)效應(yīng),必須結(jié)合生物學(xué)檢測法。
  三、分子生物學(xué)方法
  這是一類利用細(xì)胞因子的基因探針檢測特定細(xì)胞因子基因表達(dá)的技術(shù)。目前所有*的細(xì)胞因子的基因均已克隆化,故能較容易地得到某一細(xì)胞因子的cdna探針或根據(jù)已知的核苷酸序列人工合成寡聚核苷酸探針。利用基因探針檢測細(xì)胞因子mrna表達(dá)的方法多種多樣,常使用斑點(diǎn)雜交、northern blot、逆轉(zhuǎn)錄pcr,細(xì)胞或組織原位雜交等。實(shí)驗(yàn)的關(guān)鍵在于制備高質(zhì)量的核酸探針和獲得合格的待測物標(biāo)記并與目的基因互補(bǔ)的dna區(qū)域段或單鏈dna、rna。根據(jù)其來源可分為cdna探針、寡核核苷酸探針、基因組基因探針及dna探針等。其中cdna探針和人工合成寡核苷酸探針常用于斑點(diǎn)雜交及northern blot,而rna探針因穿透性好更適用于原位雜交。核酸探針技術(shù)的應(yīng)用已經(jīng)程序化,以cdna探針為例主要包括:①質(zhì)粒dna的提取;②靶dna區(qū)域段的分離;③靶dna區(qū)域段標(biāo)記;④待測樣品mrna的提取;⑤標(biāo)記cdna探針對待檢樣品的雜交;⑥放射自顯影或顯色分析。近年來出現(xiàn)的rt-pcr檢測特異性mrna的方法也廣泛用于細(xì)胞因子研究領(lǐng)域。該法具有靈敏、快速等優(yōu)點(diǎn),甚至從1~10個(gè)細(xì)胞中就可檢出其中的特異mrna。
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