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IL-4拮抗IFN的抗病毒活性測定點擊次數(shù):1742 更新時間:2011-05-23

                                         IL-4拮抗IFN的抗病毒活性測定

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        IL-4能阻斷IFN對L929細胞的保護作用,其拮抗程度與IL-4濃度相關(guān),據(jù)此可通過對L929細胞保護作用的抑制率來反映樣本中IL-4的含量。
(1)、取生長良好的L929細胞傾去培養(yǎng)液,加入0.25%胰酶消化后,充分洗滌細胞,調(diào)整細胞濃度至1×105—3×105/mL,每孔加100uL,37℃,5%C02溫箱中培養(yǎng)24h。
(2)、采用9—10日齡雞胚,制備成纖維細胞單層培養(yǎng),接種適量VSV病毒。當(dāng)細胞病變達+++—++++時,收獲病毒,并進行病毒TCID50測定。
(3)、將待檢上清和rlL-4分別與4U/mL IFN混合,在L929細胞培養(yǎng)內(nèi)加100uL。37~C,5%C02溫箱中孵育24h。
(4)、VSV攻擊:每孔加100uL病毒懸液,含200TCID;置37℃,5%C02溫箱培養(yǎng)48h,待病毒對照孔病變達+++—++++,細胞對照正常時,測定結(jié)果。
(5)、將培養(yǎng)液全部倒出,用Hanks液洗3次;每孔加入100uL0.5%結(jié)晶紫染色液,染10—20rain棄去,Hanks液洗3次,加入95%酒精。放小型振蕩器上振搖15min左右,待細胞內(nèi)染料*溶解。用分光光度計540nm波長測OD值,以準(zhǔn)確客觀地反映細胞存活數(shù)量。
(6)、注意事項:
①L929細胞在營養(yǎng)條件不良時,可呈圓形漂浮狀,此時更換培養(yǎng)液可使其恢復(fù)為梭形貼壁細胞;
②L929細胞要均勻分散于培養(yǎng)板孔中,否則可能造成某個部位細胞過密,另一部分過稀,將影響細胞單層的形成。
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