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正確選擇流式抗體及搭配熒光素點(diǎn)擊次數(shù):3211 更新時間:2011-10-27

                                      選擇合適的流式抗體及流式抗體搭配熒光素的原則

如何選擇流式抗體:www.biomart.cn/runwell/index.htm

*、選擇流式抗體要看清楚抗的是你的目標(biāo)蛋白質(zhì),目標(biāo)蛋白的物種不要搞錯了,有些抗體對好幾個物種的目標(biāo)蛋白有反應(yīng),重要的是對你的實驗有沒有影響。
第二、抗體的物種是小鼠,大鼠,兔子還是什么。以備不時之需,還是選擇你有匹配二抗。如果抗體還能夠做熒光染色啊,western blot啊用途多了更好。
第三、選擇流式抗體還要看熒光的顏色的選擇:一是你的流式儀一定要能讀,二是跟你需要counterstain的其他流式抗體錯開頻率。
第四、抗體的球蛋白亞型。因為要根據(jù)這個選擇isotype對照用抗體。每個抗體分子攜帶的熒光分子數(shù)量也要一樣才行。是一個isotype你的好幾個抗體都能用,就省了事了。
第五、到底能測試多少樣品。有些產(chǎn)品介紹沒說清楚,可以根據(jù)推薦的濃度計算一下。一是這樣才看出價格高低,二是根據(jù)自己需要選擇大支還是小支.買多了過期也是浪費(fèi)。
另外,選擇流式抗體時還可以看制作抗體所用的抗原是什么,有的是腫瘤組織提取液,有的是重組蛋白,有的是肽鏈片斷。選用哪個跟你的實驗用途有關(guān)。有些蛋白質(zhì)有很多亞型,也要注意是否測試過跟那些亞型起反應(yīng)。

流式抗體搭配流式熒光素主要有2個原則:launchbox.cn


*,每個通道只能選擇1種熒光素。
第二,各個通道之間的熒光素可以隨意搭配,因此需要注意:
1、流式抗體每個通道只能選擇1種熒光素。以Calibur為例說明,Calibur的FL1通道選擇了Alexa Fluro488就不能選FITC ,或者選擇了FITC就不能選擇AlexaFluro488。Calibur的FL3通道盡管能檢測PE-Texas Red, PE-Cy5, PerCP, PerCP-Cy5.5, PE-Cy7五個熒光素,但是我們搭配的時候只能選擇其中1個。
2、各個通道之間的熒光素可以隨意搭配:如果客戶的流式細(xì)胞儀能做4個通道,在第1個原則之下,那么每個通道隨便選出1個熒光素就可以組合成4個顏色。以2跟激光的Calibur為例,Calibur各個熒光素之間可以搭配出16種組合。比如常用的搭配是F I T C( F L 1 )+P E(F L 2)+PerCP(FL3)+APC(FL4), 這個搭配組合可以更改成Alex Fluro(FL1)+PE(FL2)+PerCP(FL3)+APC(FL4), 或者FITC(FL1)+PE(FL2)+PerCP(FL3)+Alex Fluro(FL4),或者FITC(FL1)+PE(FL2)+PE-Cy5(FL3)+APC(FL4)等等??傊?,在第1原則之下,我們可以隨意搭配和組合各個熒光素。但是需要注意的是,APC和PE-Cy5一起使用的話,上流式以后,容易導(dǎo)致補(bǔ)償過度。

 

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