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細(xì)胞污染的檢測與排除點(diǎn)擊次數(shù):1762 更新時(shí)間:2016-03-29

細(xì)胞污染主要是指細(xì)胞培養(yǎng)液中混入對細(xì)胞生存有害的成分或細(xì)胞成分不純。細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)的污染主要包括3個(gè)方面:①微生物污染:如支原體、病毒、細(xì)菌和真菌。②化學(xué)污染:如重金屬或其他非培養(yǎng)必需化學(xué)試劑。③細(xì)胞交叉污染。

一、細(xì)胞污染的檢測

(一)真菌污染

   在微生物污染中,以真菌污染zui多。zui常見真菌:煙曲霉、黑曲霉、毛霉菌、白念珠菌、酵母菌等。真菌種類繁多,形態(tài)各異,但污染后很容易發(fā)現(xiàn)。肉眼可見,大多呈白色或zui黃色小點(diǎn)漂浮于培養(yǎng)液表面;鏡下觀察呈絲狀、管狀或樹枝狀菌絲,縱橫交錯(cuò)穿行于細(xì)胞之間。但是念珠菌和酵母菌呈卵圓形態(tài),散在于細(xì)胞周邊和細(xì)胞之間牛長。

(二)細(xì)菌污染及其檢測

   大腸埃希菌、枯草桿菌、假單胞菌和葡萄球菌等是較常見的污染細(xì)菌。細(xì)菌污染后大多能改變培養(yǎng)液pH使培養(yǎng)液變混濁;多數(shù)情況下培養(yǎng)液短期內(nèi)顏色變黃,出現(xiàn)明顯污濁現(xiàn)象。也有的對培養(yǎng)液無肉眼可見影響,只在鏡下觀察發(fā)現(xiàn)菌體時(shí)才能感知污染。

(三)支原體污染

 

   支原體污染是細(xì)胞培養(yǎng)中zui常見、不易被察覺并可以干擾實(shí)驗(yàn)結(jié)果的一種污染。細(xì)胞受支原體污染后,多數(shù)細(xì)胞無明顯變化,或有微細(xì)變化卻由于傳代和換液而被緩解。外觀上往往給人以“正常”的感覺,實(shí)則污染細(xì)胞會(huì)受到多方面潛在的影響,如細(xì)胞變形、抑制細(xì)胞生長。

   不同的微生物污染對細(xì)胞的影響有差別,檢測方法也不盡相同:可以通過目測、顯微鏡觀察、電鏡檢查、微生物培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)、免疫學(xué)和分子生物學(xué)等方法進(jìn)行確定。

二、細(xì)胞污染的排除

  培養(yǎng)的細(xì)胞一旦被微生物污染,應(yīng)及時(shí)處理。通常選高壓滅菌被污染的細(xì)胞,然后棄掉。如果有價(jià)值的細(xì)胞被污染,并且污染程度比較輕,可通過及時(shí)排除污染物,挽救細(xì)胞恢復(fù)正常。常用的排除微生物污染方法有如下幾種:

(一)抗生素排除法

   抗生素是細(xì)胞培養(yǎng)中殺滅微生物的主要手段。一些有價(jià)值的細(xì)胞被污染后,需用抗生素挽救,在這種情況下,可采用5~lO倍于常用量的沖擊法,加入高濃度抗生素后作用24~48h,再換人常規(guī)培養(yǎng)液。 

(二)加溫除茵

   根據(jù)支原體耐熱性能差的特點(diǎn)。有人將受支原體污染的細(xì)胞置于4l℃中作用5~10h(zui長可達(dá)18h)以殺滅支原體。但41℃對培養(yǎng)細(xì)胞本身也有較大影響,故在處理前,應(yīng)先進(jìn)行預(yù)試驗(yàn)。確定m限度殺傷支原體而對細(xì)胞影響較小的處理時(shí)間。

(三)動(dòng)物體內(nèi)接種

   受微生物污染的腫瘤細(xì)胞可接種在同種動(dòng)物皮下或腹腔,借動(dòng)物體內(nèi)免疫系統(tǒng)消滅污染的微生物,腫瘤細(xì)胞卻能在體內(nèi)繼續(xù)生長,待一定時(shí)間后,從體內(nèi)取出再進(jìn)行培養(yǎng)繁殖。

(四)與巨噬細(xì)胞共培養(yǎng)

   在良好的體外培養(yǎng)條件下巨噬細(xì)胞可存活7~10d,并可分泌一些細(xì)胞生長因子支持其他細(xì)胞的克隆生長。與體內(nèi)的情況相似,巨噬細(xì)胞在體外培養(yǎng)條件下仍然可吞噬微生物并將其消化。利用96孔培養(yǎng)板將極少量的培養(yǎng)細(xì)胞與巨噬細(xì)胞共培養(yǎng),可以在高度稀釋培養(yǎng)細(xì)胞、極大地降低微生物污染程度的同時(shí),更有效地發(fā)揮巨噬細(xì)胞清除污染的效能。本方法與抗生素聯(lián)合應(yīng)
用效果更佳。

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