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流式細(xì)胞凋亡實(shí)驗(yàn)原理點(diǎn)擊次數(shù):3392 更新時(shí)間:2016-03-30

其原理主要是根據(jù)細(xì)胞凋亡時(shí)在細(xì)胞、亞細(xì)胞和分子水平上所發(fā)生的特征性改變。這些改變包括細(xì)胞核的改變、細(xì)胞器的改變、細(xì)胞膜成分的改變和細(xì)胞形態(tài)的改變等,其中細(xì)胞核的改變特征性,主要包括以下幾個(gè)方面:

 

1. 細(xì)胞核的改變

   由于凋亡細(xì)胞核的改變,造成各種染色體熒光染料對(duì)凋亡細(xì)胞DNA可染性發(fā)生改變。研究表明,用各種染色體熒光染料對(duì)經(jīng)固定的凋亡細(xì)胞進(jìn)行染色,其DNA可染性降低。許多學(xué)者把這種DNA可染性的降低認(rèn)為是凋亡細(xì)胞的標(biāo)志之一。

 

2. 光散射特性

   凋亡細(xì)胞形態(tài)上的改變影響它們的光散射特性。在流式細(xì)胞儀上,前散射光與細(xì)胞的大小有關(guān),而側(cè)散射光反映的是光在細(xì)胞內(nèi)的折射作用,與細(xì)胞內(nèi)的顆粒多少有關(guān)。在細(xì)胞凋亡時(shí),細(xì)胞固縮,體積變小,故前散射光降低,這一特性往往被認(rèn)為是凋亡細(xì)胞的特點(diǎn)之一。此外細(xì)胞凋亡時(shí)由于染色體降解,核破裂形成,細(xì)胞內(nèi)顆粒往往增多,故凋亡細(xì)胞側(cè)散射光常增加。細(xì)胞壞死時(shí),由于細(xì)胞腫脹,其前散射光增大;側(cè)散射光在細(xì)胞壞死時(shí)也增大,因此可根據(jù)前散射光和側(cè)散射光區(qū)別凋亡細(xì)胞和壞死細(xì)胞。但需要注意的是,根據(jù)前散射光和側(cè)散射光判斷凋亡細(xì)胞的可靠性受被檢測細(xì)胞形態(tài)上的均一性和核胞漿比率影響很大。因此在某些淋巴細(xì)胞凋亡中,用光散射特性檢測凋亡的可靠性較好,而在腫瘤細(xì)胞凋亡中,其可靠性就較差。根據(jù)光散射特性檢測凋亡細(xì)胞zui主要的優(yōu)點(diǎn)是可以將光散射特性與細(xì)胞的表面免疫熒光分析結(jié)合起來,用以區(qū)別經(jīng)這些特殊處理發(fā)生選擇性凋亡的淋巴細(xì)胞亞型。也可用于活細(xì)胞的分類。

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