熒光顯微鏡觀察細(xì)胞熒光染色
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一、熒光顯微鏡的成像原理
熒光顯微鏡是一種較為常用的的
光學(xué)顯微鏡，其基本原理是利用一定波長(zhǎng)的激發(fā)光對(duì)樣品進(jìn)行激發(fā)，使之產(chǎn)生一定波長(zhǎng)的熒光，從而用于對(duì)樣品結(jié)構(gòu)或其組分進(jìn)行定性、定位、定量觀察檢測(cè)。
什么是熒光?
物質(zhì)中的電子吸收光的能量由低能狀態(tài)轉(zhuǎn)變?yōu)楦吣軤顟B(tài)，再回到低能狀態(tài)時(shí)釋放出的光。
即：物質(zhì)吸收短波光，發(fā)射出的長(zhǎng)波光。
熒光的性質(zhì)
保持固有的熒光特性
熒光波長(zhǎng)＞激發(fā)波長(zhǎng)
熒光強(qiáng)度極小于激發(fā)光的強(qiáng)度
有不同程度的衰減
熒光強(qiáng)度取決于激發(fā)光強(qiáng)度、被檢物濃度、熒光效率
熒光顯微鏡的優(yōu)點(diǎn)和用途（生物秀儀器頻道www.bbioo.com）
優(yōu)點(diǎn)：
檢出能力高
對(duì)細(xì)胞的刺激小
能進(jìn)行多重染色
用途：
物體構(gòu)造的觀察
熒光的有無(wú)、色調(diào)比較進(jìn)行物質(zhì)判別
發(fā)熒光量的測(cè)定對(duì)物質(zhì)定性、定量分析
實(shí)驗(yàn)?zāi)康呐c教學(xué)要求
1.掌握熒光顯微鏡的成像基本原理及其使用；
熒光素的特性
熒光顯微鏡技術(shù)在生命科學(xué)研究中的應(yīng)用
1.對(duì)細(xì)胞結(jié)構(gòu)或組分的定性、定位、半定量研究。
2.作為生物大分子篩選與鑒定的標(biāo)記物。
通過(guò)特殊的暗視野聚光器，使照明光線改變途徑，不直接進(jìn)入物鏡，而是傾斜地照射到樣品上，由樣品表面的繞射光線入射到物鏡內(nèi)，產(chǎn)生樣品的衍射圖象。
三、試劑與器材
青蛙、洋蔥、人正常肝組織切片和脂肪肝組織切片（HE染色）
甲醇、1‰丫啶橙、濾紙、吸管、載玻片
熒光顯微鏡、暗視野顯微鏡、普通光學(xué)顯微鏡
四、實(shí)驗(yàn)內(nèi)容和實(shí)驗(yàn)步驟
1.蛙血細(xì)胞染色觀察：取少許蛙血→常規(guī)血涂片→涼干→甲醇固定10min→1‰丫啶橙染色5min→水洗→
室溫
干燥（濾紙擦干玻片底面）→熒光顯微鏡觀察（先低倍后高倍觀察）（可在同一玻片上觀察未熒光染色的血細(xì)胞）
2.取洋蔥→撕取一小片內(nèi)表皮→平面單層鋪展于玻片上→室溫涼干→1‰丫啶橙染色5min→水洗（用吸管，小心掉片）→室溫干燥（或用濾紙擦干）
→熒光顯微鏡觀察
3.暗視野顯微鏡觀察蛙血細(xì)胞（示范）
4.觀察人正常肝組織切片和脂肪肝組織切片（HE染色）
五、注意事項(xiàng)
熒光顯微鏡要在光線盡量暗的環(huán)境下觀察。
使用熒光顯微鏡時(shí)要注意不要直接觀察激發(fā)光源，保護(hù)眼睛。
暗視野顯微鏡要在光線盡量暗的環(huán)境下觀察。
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